12個做標準曲線過程中的常見問題2021-03-25 08:56
/ 標準曲線 / 經(jīng)典問題 標準曲線的制作中,經(jīng)常會有這樣那樣的問題,比如:一定要做5個點?線性相關(guān)系數(shù)R值必須幾個9才達標?標曲是每天都做還是每次都做?標曲是否必須通過原點? 今天小編為大家整理了標曲相關(guān)的12個經(jīng)典問題,一起來看看吧! 1、標準曲線的做法依據(jù)? GB/T22554-2010《基于標準樣品的線性校準》中: 1、標準曲線的濃度范圍應覆蓋正常操作條件下的被測量范圍; 2、標準樣品的組分盡量與被測樣品組分一致; 3、標準樣品的濃度值應等距離的分布在被測量范圍; 4、標準樣品數(shù)量至少應有3個濃度; 5、每個標準點至少重復2次,這個重復是指從稀釋開始。 如果國家標準有相應的濃度系列推薦,盡量按國家標準。工作中我們經(jīng)常采用線性校準,因為線性方程最為簡潔。 2、什么是校準曲線? 校準曲線包括標準曲線和工作曲線,前者用標準溶液系列直接測量,沒有經(jīng)過預處理過程,這對于樣品往往造成較大誤差;而后者所使用的標準溶液經(jīng)過了與樣品相同的消解、凈化、測量等全過程。 3、首先標曲要做幾個點? 標準曲線需要幾個數(shù)據(jù)點,是由所檢測組分的濃度范圍、分析儀響應特性、干擾因素、濃度與檢測信號響應類型有關(guān)的。 3個點:對于一些低濃度,特別是微量分析,且濃度范圍不是很大的,檢測器響應可靠,背景干擾非常小的,則可以選用較少的工作點就行,一般有3個濃度點就足夠了,有些甚至可以只用一個濃度點就行,另一個點直接用坐標原點。 實際上,我們一般是做五個點(不包括零濃度);一般以檢出限的5~10倍為第一個點,以后根據(jù)1倍遞增,最高濃度是最低濃度的10~20倍為宜(理化分析實驗為例)。當然,要根據(jù)儀器的靈敏度來調(diào)整。 4、標曲R值是幾個9才合格? 實驗室應按檢測標準(方法)的要求使用標準溶液或標準物質(zhì)建立標準曲線。所用標準溶液或標準物質(zhì)應覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標準(方法)如無具體的要求,至少使用5個標樣(除空白外)建立線性標準曲線,每個點重復測定1-3次,對于篩選方法,線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應低于0.98,對于確證方法,相關(guān)系數(shù)不應低于0.99。 其實,大于0.99是判斷是否為線性相關(guān)的一個標準,實際應用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監(jiān)測結(jié)果只用接近最高濃度一半(中間濃度)的位置才比較準確,如果線性大于0.999的話,在整個線性范圍內(nèi)都會有一個比較滿意的結(jié)果。 如果檢測的線性不好,可以減少標準的覆蓋范圍,將標準的濃度調(diào)整到待測樣品濃度附近,這樣結(jié)果也是非常準確的。例如,樣品的濃度約20ppb,但在0~50ppb范圍建立標準曲線,但線性非常不理想,這時可以將標準范圍調(diào)整到15~25ppb之間,作五個標準。 5、標準曲線的檢驗? (1)線性檢驗: 即檢驗校準曲線的精密度。對于以4-6個濃度單位所獲得的測量信號值繪制的校準曲線,分光光度法一般要求其相關(guān)系數(shù) | r | ≥0.9990,否則應找出原因并加以糾正,重新繪制合格的校準曲線。
即檢驗校準曲線的準確度,在線性檢驗合格的基礎(chǔ)上,對其進行線性回歸,得出回歸方程 y= a+bx ,然后將所得截距a與0作t檢驗,當取95%置信水平,經(jīng)檢驗無顯著性差異時,a可做0處理,方程簡化為y= bx,移項得x=y/b。在線性范圍內(nèi),可代替查閱校準曲線,直接將樣品測量信號值經(jīng)空白校正后,計算出試樣濃度。
即檢驗分析方法的靈敏度,方法靈敏度是隨實驗條件的變化而改變的。在完全相同的分析條件下,僅由于操作中的隨機誤差導致的斜率變化不應超出一定的允許范圍,此范圍因分析方法的精度不同而異。例如,一般而言,分子吸收分光光度法要求其相對差值小于5%,而原子吸收分光光度法則要求其相對差值小于10%等。 6、標準曲線有效期的規(guī)定? (1)標準曲線屬于實驗室質(zhì)量控制的范圍,按照《實驗室資質(zhì)認定評審準則》中結(jié)果控制的要求:定期使用有證標準物質(zhì)(參考物質(zhì))進行監(jiān)控和/或使用次級標準物質(zhì)(參考物質(zhì))開展內(nèi)部質(zhì)量控制。
7、每次開機都必須做標準曲線? 從檢測的要求來說,因為: 1、每天所配的流動相都會有所不同,導致出峰的時間都會有一定的差異,峰面積相應都有所差異。 8、校準曲線能不能長期使用? 每批樣品應測定一個校準曲線中間點濃度的標準液,其測定濃度與校準曲線標準點的濃度相對誤差不得超過規(guī)定范圍,如果超過規(guī)定相對誤差,需重新繪制校準曲線。 一般的做法,根據(jù)檢測的頻率來做,如果該項目天天都要檢測,并且檢測量較多時,要求至少每周做一次曲線。如果檢測量上,一個月數(shù)量極少的話,就一個月做一次曲線。當然,儀器如果出現(xiàn)故障并大修后回來的,經(jīng)過檢定后,需要重新做曲線。 9、標準曲線是否必須過原點? 標準曲線不一定非要過原點,只要線性好就可以了。因為做空白的話基本上不會過原點。過原點是強制過的,實際曲線可能不過,就會造成誤差。不過原點是因為有系統(tǒng)誤差。
10、標準曲線的線性范圍? 線性范圍這個大家都比較清楚,主要從相關(guān)系數(shù)r看,一般要求r大于等于三個九。之前做實驗有時候濃度高時,線性不好,高濃度點不在標準曲線上,而是在標準曲線的下面,而且離擬合的標準曲線比較遠。遇到這種情況,標準曲線的線性相關(guān)系數(shù)就很差,有時候才一個九,最后我終于想明白了,如果自己用手動擬合的話,用平滑的曲線去連接所有點的話,你就會發(fā)現(xiàn),如果在線性范圍內(nèi),連接起來就是直線,如果超出了線性范圍,連接起來就是一條彎曲的曲線。 11、相關(guān)系數(shù)的有效數(shù)字? GB5750.3-2006 8.2.7項有如下規(guī)定:校準曲線相關(guān)系數(shù)只舍不入,保留到小數(shù)點后出現(xiàn)非9的一位,如0.99989→0.9998。如果小數(shù)點后都是9時,最多保留小數(shù)點后4位。 12、Y=bX和二次曲線的選用? 標準曲線我們通常采用的是Y=a+bX,曲線擬合完必須要做統(tǒng)計檢驗,且要做統(tǒng)計完備的線性檢驗和失擬檢驗,然后再做a與0的差別檢驗,如果a與0的統(tǒng)計學上無差異,你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線,擬合出來后同樣做線性檢驗和失擬檢驗,如果線性檢驗合格(P<0.05)且失擬檢驗合格(p>0.05)此時你就可以采用Y=bX。
了解各個分析項目校準曲線斜率的穩(wěn)定性及影響穩(wěn)定性的主要因素,可決定是否能采用帶標點檢驗原校準曲線,省略重新制作校準曲線;從校準曲線斜率的變化,可判斷標準溶液的穩(wěn)定性,從而確定其標定周期;分析低濃度樣品時,應使用高純度的水和試劑,以減少空白值,降低樣品的分析誤差。 來源:食品實驗室服務(wù) 希望以上內(nèi)容對您有所幫助! ● 標準曲線制作好幫手 清時捷科技:D-50精密稀釋配液器 程序化對樣品進行定量或連續(xù)稀釋,支持從0.1mL到3000mL大范圍的精密體積定容,最小體積示值低至0.01mL。 解決制作標準曲線時跳點、線性不理想,進行簡單的按鍵操作即能完成稀釋并得出一系列標準濃度點。 ●往期推薦 ● 聲明 本文來源于食品實驗室服務(wù),僅供分享不作商業(yè)用途,版權(quán)歸原作者和原出處所有。如原版權(quán)所有者不同意轉(zhuǎn)載的,請及時聯(lián)系我們(0755-21016230 / sinsche@sinsche.com),我們會立即刪除,謝謝! |