12個(gè)做標(biāo)準(zhǔn)曲線過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題2021-03-25 08:56
/ 標(biāo)準(zhǔn)曲線 / 經(jīng)典問(wèn)題 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作中,經(jīng)常會(huì)有這樣那樣的問(wèn)題,比如:一定要做5個(gè)點(diǎn)?線性相關(guān)系數(shù)R值必須幾個(gè)9才達(dá)標(biāo)?標(biāo)曲是每天都做還是每次都做?標(biāo)曲是否必須通過(guò)原點(diǎn)? 今天小編為大家整理了標(biāo)曲相關(guān)的12個(gè)經(jīng)典問(wèn)題,一起來(lái)看看吧! 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法依據(jù)? GB/T22554-2010《基于標(biāo)準(zhǔn)樣品的線性校準(zhǔn)》中: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍應(yīng)覆蓋正常操作條件下的被測(cè)量范圍; 2、標(biāo)準(zhǔn)樣品的組分盡量與被測(cè)樣品組分一致; 3、標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度值應(yīng)等距離的分布在被測(cè)量范圍; 4、標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù)量至少應(yīng)有3個(gè)濃度; 5、每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)至少重復(fù)2次,這個(gè)重復(fù)是指從稀釋開(kāi)始。 如果國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)有相應(yīng)的濃度系列推薦,盡量按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。工作中我們經(jīng)常采用線性校準(zhǔn),因?yàn)榫€性方程最為簡(jiǎn)潔。 2、什么是校準(zhǔn)曲線? 校準(zhǔn)曲線包括標(biāo)準(zhǔn)曲線和工作曲線,前者用標(biāo)準(zhǔn)溶液系列直接測(cè)量,沒(méi)有經(jīng)過(guò)預(yù)處理過(guò)程,這對(duì)于樣品往往造成較大誤差;而后者所使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過(guò)了與樣品相同的消解、凈化、測(cè)量等全過(guò)程。 3、首先標(biāo)曲要做幾個(gè)點(diǎn)? 標(biāo)準(zhǔn)曲線需要幾個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn),是由所檢測(cè)組分的濃度范圍、分析儀響應(yīng)特性、干擾因素、濃度與檢測(cè)信號(hào)響應(yīng)類型有關(guān)的。 3個(gè)點(diǎn):對(duì)于一些低濃度,特別是微量分析,且濃度范圍不是很大的,檢測(cè)器響應(yīng)可靠,背景干擾非常小的,則可以選用較少的工作點(diǎn)就行,一般有3個(gè)濃度點(diǎn)就足夠了,有些甚至可以只用一個(gè)濃度點(diǎn)就行,另一個(gè)點(diǎn)直接用坐標(biāo)原點(diǎn)。 實(shí)際上,我們一般是做五個(gè)點(diǎn)(不包括零濃度);一般以檢出限的5~10倍為第一個(gè)點(diǎn),以后根據(jù)1倍遞增,最高濃度是最低濃度的10~20倍為宜(理化分析實(shí)驗(yàn)為例)。當(dāng)然,要根據(jù)儀器的靈敏度來(lái)調(diào)整。 4、標(biāo)曲R值是幾個(gè)9才合格? 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)(方法)的要求使用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。所用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)覆蓋被測(cè)樣品的濃度范圍。檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)(方法)如無(wú)具體的要求,至少使用5個(gè)標(biāo)樣(除空白外)建立線性標(biāo)準(zhǔn)曲線,每個(gè)點(diǎn)重復(fù)測(cè)定1-3次,對(duì)于篩選方法,線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.98,對(duì)于確證方法,相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。 其實(shí),大于0.99是判斷是否為線性相關(guān)的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn),實(shí)際應(yīng)用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監(jiān)測(cè)結(jié)果只用接近最高濃度一半(中間濃度)的位置才比較準(zhǔn)確,如果線性大于0.999的話,在整個(gè)線性范圍內(nèi)都會(huì)有一個(gè)比較滿意的結(jié)果。 如果檢測(cè)的線性不好,可以減少標(biāo)準(zhǔn)的覆蓋范圍,將標(biāo)準(zhǔn)的濃度調(diào)整到待測(cè)樣品濃度附近,這樣結(jié)果也是非常準(zhǔn)確的。例如,樣品的濃度約20ppb,但在0~50ppb范圍建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,但線性非常不理想,這時(shí)可以將標(biāo)準(zhǔn)范圍調(diào)整到15~25ppb之間,作五個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。 5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)? (1)線性檢驗(yàn): 即檢驗(yàn)校準(zhǔn)曲線的精密度。對(duì)于以4-6個(gè)濃度單位所獲得的測(cè)量信號(hào)值繪制的校準(zhǔn)曲線,分光光度法一般要求其相關(guān)系數(shù) | r | ≥0.9990,否則應(yīng)找出原因并加以糾正,重新繪制合格的校準(zhǔn)曲線。
即檢驗(yàn)校準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確度,在線性檢驗(yàn)合格的基礎(chǔ)上,對(duì)其進(jìn)行線性回歸,得出回歸方程 y= a+bx ,然后將所得截距a與0作t檢驗(yàn),當(dāng)取95%置信水平,經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異時(shí),a可做0處理,方程簡(jiǎn)化為y= bx,移項(xiàng)得x=y/b。在線性范圍內(nèi),可代替查閱校準(zhǔn)曲線,直接將樣品測(cè)量信號(hào)值經(jīng)空白校正后,計(jì)算出試樣濃度。
即檢驗(yàn)分析方法的靈敏度,方法靈敏度是隨實(shí)驗(yàn)條件的變化而改變的。在完全相同的分析條件下,僅由于操作中的隨機(jī)誤差導(dǎo)致的斜率變化不應(yīng)超出一定的允許范圍,此范圍因分析方法的精度不同而異。例如,一般而言,分子吸收分光光度法要求其相對(duì)差值小于5%,而原子吸收分光光度法則要求其相對(duì)差值小于10%等。 6、標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期的規(guī)定? (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線屬于實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的范圍,按照《實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則》中結(jié)果控制的要求:定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(參考物質(zhì))進(jìn)行監(jiān)控和/或使用次級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(參考物質(zhì))開(kāi)展內(nèi)部質(zhì)量控制。
7、每次開(kāi)機(jī)都必須做標(biāo)準(zhǔn)曲線? 從檢測(cè)的要求來(lái)說(shuō),因?yàn)椋?/p> 1、每天所配的流動(dòng)相都會(huì)有所不同,導(dǎo)致出峰的時(shí)間都會(huì)有一定的差異,峰面積相應(yīng)都有所差異。 8、校準(zhǔn)曲線能不能長(zhǎng)期使用? 每批樣品應(yīng)測(cè)定一個(gè)校準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)濃度的標(biāo)準(zhǔn)液,其測(cè)定濃度與校準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的濃度相對(duì)誤差不得超過(guò)規(guī)定范圍,如果超過(guò)規(guī)定相對(duì)誤差,需重新繪制校準(zhǔn)曲線。 一般的做法,根據(jù)檢測(cè)的頻率來(lái)做,如果該項(xiàng)目天天都要檢測(cè),并且檢測(cè)量較多時(shí),要求至少每周做一次曲線。如果檢測(cè)量上,一個(gè)月數(shù)量極少的話,就一個(gè)月做一次曲線。當(dāng)然,儀器如果出現(xiàn)故障并大修后回來(lái)的,經(jīng)過(guò)檢定后,需要重新做曲線。 9、標(biāo)準(zhǔn)曲線是否必須過(guò)原點(diǎn)? 標(biāo)準(zhǔn)曲線不一定非要過(guò)原點(diǎn),只要線性好就可以了。因?yàn)樽隹瞻椎脑捇旧喜粫?huì)過(guò)原點(diǎn)。過(guò)原點(diǎn)是強(qiáng)制過(guò)的,實(shí)際曲線可能不過(guò),就會(huì)造成誤差。不過(guò)原點(diǎn)是因?yàn)橛邢到y(tǒng)誤差。
10、標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍? 線性范圍這個(gè)大家都比較清楚,主要從相關(guān)系數(shù)r看,一般要求r大于等于三個(gè)九。之前做實(shí)驗(yàn)有時(shí)候濃度高時(shí),線性不好,高濃度點(diǎn)不在標(biāo)準(zhǔn)曲線上,而是在標(biāo)準(zhǔn)曲線的下面,而且離擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較遠(yuǎn)。遇到這種情況,標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)就很差,有時(shí)候才一個(gè)九,最后我終于想明白了,如果自己用手動(dòng)擬合的話,用平滑的曲線去連接所有點(diǎn)的話,你就會(huì)發(fā)現(xiàn),如果在線性范圍內(nèi),連接起來(lái)就是直線,如果超出了線性范圍,連接起來(lái)就是一條彎曲的曲線。 11、相關(guān)系數(shù)的有效數(shù)字? GB5750.3-2006 8.2.7項(xiàng)有如下規(guī)定:校準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)只舍不入,保留到小數(shù)點(diǎn)后出現(xiàn)非9的一位,如0.99989→0.9998。如果小數(shù)點(diǎn)后都是9時(shí),最多保留小數(shù)點(diǎn)后4位。 12、Y=bX和二次曲線的選用? 標(biāo)準(zhǔn)曲線我們通常采用的是Y=a+bX,曲線擬合完必須要做統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn),且要做統(tǒng)計(jì)完備的線性檢驗(yàn)和失擬檢驗(yàn),然后再做a與0的差別檢驗(yàn),如果a與0的統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差異,你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線,擬合出來(lái)后同樣做線性檢驗(yàn)和失擬檢驗(yàn),如果線性檢驗(yàn)合格(P<0.05)且失擬檢驗(yàn)合格(p>0.05)此時(shí)你就可以采用Y=bX。
了解各個(gè)分析項(xiàng)目校準(zhǔn)曲線斜率的穩(wěn)定性及影響穩(wěn)定性的主要因素,可決定是否能采用帶標(biāo)點(diǎn)檢驗(yàn)原校準(zhǔn)曲線,省略重新制作校準(zhǔn)曲線;從校準(zhǔn)曲線斜率的變化,可判斷標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性,從而確定其標(biāo)定周期;分析低濃度樣品時(shí),應(yīng)使用高純度的水和試劑,以減少空白值,降低樣品的分析誤差。 來(lái)源:食品實(shí)驗(yàn)室服務(wù) 希望以上內(nèi)容對(duì)您有所幫助! ● 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作好幫手 清時(shí)捷科技:D-50精密稀釋配液器 程序化對(duì)樣品進(jìn)行定量或連續(xù)稀釋,支持從0.1mL到3000mL大范圍的精密體積定容,最小體積示值低至0.01mL。 解決制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)跳點(diǎn)、線性不理想,進(jìn)行簡(jiǎn)單的按鍵操作即能完成稀釋并得出一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度點(diǎn)。 ●往期推薦 ● ● 清時(shí)捷協(xié)辦 | 水系統(tǒng)智能化技術(shù)研討會(huì)(2020-2021)邀您參加 聲明 本文來(lái)源于食品實(shí)驗(yàn)室服務(wù),僅供分享不作商業(yè)用途,版權(quán)歸原作者和原出處所有。如原版權(quán)所有者不同意轉(zhuǎn)載的,請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們(0755-21016230 / sinsche@sinsche.com),我們會(huì)立即刪除,謝謝! |